凱氏定氮儀是利用凱氏定氮法對物質(zhì)中蛋白質(zhì)含量進行測定的專用儀器。凱氏定氮儀按其配置分，可以分為全自動凱氏定氮儀和半自動定氮儀。其中全自動凱氏定氮儀包括消化爐和凱氏蒸餾裝置。凱氏定氮儀操作時可以分為人工模式和自動模式，不同的實驗者，可以根據(jù)對實驗操作的熟練程度，自由選擇哪種方式。一般的，新手我們推薦使用自動模式，可以為你省去很多的步驟。目前，凱氏定氮儀已經(jīng)廣泛使用于測定乳核乳制品中蛋白質(zhì)的測定。
下面我們主要介紹下，我們在使用全自動凱氏定氮儀測定蛋白質(zhì)含量時，如何清洗定氮儀。
儀器安裝前，凱氏定氮儀各部件需經(jīng)一般方法洗滌干凈，所用橡皮管、塞須浸在10%NaOH溶液中，煮約10min，水洗、水煮10min，再水洗數(shù)次，然后安裝并固定在一只鐵架臺上。
儀器使用前，微量全部管道都須經(jīng)水蒸氣洗滌，以除去管道內(nèi)可能殘留的氨，正在使用的儀器，每次測樣前，蒸氣洗滌5min即可。較長時間未使用的儀器，重復蒸氣洗滌，不得少于三次，并檢查儀器是否正常。仔細檢查各個連接處，保證不漏氣。這樣，一方面保證了儀器的清潔，另一方面，也同時對儀器進行了檢查，一些壞的零部件，可以及時被查出并替換。
儀器安裝完后，我們需具體對儀器的內(nèi)部進行清潔。首先在凱氏定氮儀蒸氣發(fā)生器中加約2/3體積蒸餾水，加入數(shù)滴硫酸使其保持酸性，以避免水中的氨被蒸出而影響結果，并放入少許沸石（或毛細管等），以防爆沸。這個步驟有點類似于凱氏定氮法的消化前步驟，用相應的試劑對其進行清洗。沿小玻杯壁加入蒸餾水約20mL讓水經(jīng)插管流入反應室，但玻杯內(nèi)的水不要放光，塞上棒狀玻塞，保持水封，防止漏氣。這一步可直接驗證插管是否可以使用。蒸氣發(fā)生后，立即關閉廢液排放管上的開關，使蒸氣只能進入反應室，導致反應室內(nèi)的水迅速沸騰，蒸出蒸氣由反應室上端口通過定氮球進入冷凝管冷卻，在冷凝管下端放置一個錐形瓶接收冷凝水。從定氮球發(fā)燙開始計時，連續(xù)蒸煮5min，然后移開煤氣燈。沖洗完畢，夾緊蒸氣發(fā)生器與收集器之間的連接橡膠管，由于氣體冷卻壓力降低，反應室內(nèi)廢液自動抽到反應室外殼中，打開廢液排出口夾子放出廢液。整個清洗過程，到這里就結束了，經(jīng)過清洗這個過程，儀器內(nèi)部環(huán)境已經(jīng)符合我們測定蛋白質(zhì)含量的需求，另外，儀器的各部件也得到了檢驗，可以及時更換漏氣或者其他壞了的部分。根據(jù)以上步驟重復清洗2～3次，再在冷凝管下?lián)Q放一個盛有硼酸-指示劑混合液的錐形瓶使冷凝管下口完全浸沒在溶液中，蒸餾1～2min，觀察錐形瓶內(nèi)的溶液是否變色。如不變色，表示蒸餾裝置內(nèi)部已洗干凈。移去錐形瓶，再蒸餾1～2min，用蒸餾水沖洗冷凝器下口，關閉煤氣燈，儀器即可供測樣品使用。
這樣，凱氏定氮儀整個清洗過程就結束了。凱氏定氮儀在測定蛋白質(zhì)含量前，一般都需要經(jīng)過清洗，這樣對于測定結果，會更加精確。另外，也可以保證實驗室人員的安全，因為在清洗過程中，對儀器進行了檢查，排除了因為儀器的故障而造成了危險。
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